薄層色譜法是常用的微量分析方法,廣泛應用中草藥研究和日常檢驗,但常出現(xiàn)斑點異常現(xiàn)象給結果判斷帶來困難,應注意避免和克服。
1、拖尾現(xiàn)象
拖尾現(xiàn)象在薄層色譜中較為常見,結果使斑點間界限模糊,結果難以判斷。
產(chǎn)生原因及解決方法
(1)點樣過量在薄層色譜過程中化合物在薄層板上進行吸附———解吸附的移動過程中,任何一類吸附劑,它們的負載化合物的能力是有一定限度的,因點樣過量而超載后,過剩的化合物被拋在后面,形成拖尾現(xiàn)象。
(2)重復點樣樣點雖在同一垂直線而樣點圓心未重合,致使樣點呈近橢圓形,也是形成拖尾現(xiàn)象的又一原因,為避免以上異常現(xiàn)象,應選擇合適的點樣量和復點樣過程中,樣點圓心應重合。
2、邊緣效應
邊緣鏟應是樣品在層析時,薄層板兩邊的斑點比中間斑點移動快,并向兩邊偏斜。其原因是用混合溶劑展開過程中,其中極性較弱和沸點較低的溶劑在薄層板兩邊沿處較易揮發(fā),使薄層板上展開劑的比例不一致,極性發(fā)生變化,而出現(xiàn)邊緣效應。
為避免上述現(xiàn)象的出現(xiàn):增加層板缸中溶劑蒸氣濃度,在層析缸內(nèi)壁貼上浸濕展開劑的濾紙或選擇內(nèi)徑和長度適宜的層析缸進行層析。選擇適宜的單一溶劑代替混合溶劑。采用共沸溶劑代替一般混合溶劑。
3、S形及波形斑點
S形斑點是指含多種成分的樣品層析時,斑點不是順次分布于原點至展開前沿的垂直線上,而是呈s形分布于垂直線兩側。波形斑點是指某些含多種成分的樣品液,順次點于同一起始線上,展開后,這些成分相同的斑點不呈直線狀平行于起始線,而是呈波浪形。
產(chǎn)生原因為薄層板厚薄不勻。為避免上述現(xiàn)象的出現(xiàn)應選用厚薄均勻的薄層板。
4、念珠狀斑點
念珠狀斑點是指化合物斑點之間距離小,相互連接呈念珠狀。
產(chǎn)生原因及克服方法:樣品中成分過多,在一定長度的薄層板上,排布不開,彼此重疊。可適當增加層析板長度,使斑點距離加大或采用雙向層析,使所含成分向兩個方向展開可以避免念珠狀斑點的出現(xiàn)。多次點樣時,點樣中心不重合,形成復斑。應以適當濃度供試液一次點樣,若多次點樣,點樣中心必須重合。
5、展開后斑點RF值不穩(wěn)定斑點RF值與文獻規(guī)定不符或重復操作RF值時大時小。
主要原因為:層析溫度不穩(wěn)定,在采用混合溶劑展開時,由于溫度不穩(wěn)定使展開劑的比例發(fā)生變化。薄層厚薄不勻。吸附劑溶劑質量差異。根據(jù)以上原因在層析過程中除選擇質量較好的吸附劑與溶劑外,同批或同一品種應選擇同廠、同批號的吸附劑和溶劑,層析時室溫差控制在5℃之間,制板時吸附劑顆粒應選擇直徑顆粒制板,板材平整,薄層厚薄均勻。