液相色譜儀分析中,在色譜柱正常,樣品濃度適宜,分析方法合適,色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下,峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳。但在實(shí)際操作中,如果對(duì)樣品不了解,前處理不恰當(dāng)或者分析方法不合理等,會(huì)出現(xiàn)峰形不正常的情況,其中雙峰現(xiàn)象就是液相色譜中常見(jiàn)的問(wèn)題之一。出現(xiàn)雙峰的原因有哪些呢?
 
色譜雙峰指的是明明是同一種物質(zhì),但在色譜圖中卻呈現(xiàn)雙峰,讓實(shí)驗(yàn)人員誤認(rèn)為含有兩種物質(zhì)。
 
一物豈能容二峰?譜析淺析液相色譜儀“雙峰”問(wèn)題-氣相色譜儀廠家_國(guó)產(chǎn)氣相色譜儀_白酒分析氣相色譜儀-山東譜析科學(xué)儀器有限公司
出現(xiàn)液相色譜儀色譜圖出現(xiàn)“”雙峰“”的原因譜析色譜小編認(rèn)為一般有以下幾種問(wèn)題

色譜柱的問(wèn)題
 
如果在樣品分析時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜峰都有雙峰出現(xiàn),尤其在采用單一純物質(zhì)時(shí),則可以確定是色譜柱出現(xiàn)問(wèn)題了,一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的。
 
如果進(jìn)樣量少,原來(lái)色譜柱正常,色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰,不一定拖尾,這一般應(yīng)是柱頭受堵,將色譜柱反過(guò)來(lái)接,用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑,將堵在柱頭的殘留物沖掉,再反過(guò)來(lái),一般情況下就行了。當(dāng)然不反沖,正沖有時(shí)也會(huì)正常的。
 
如果峰拖尾,雙峰強(qiáng)弱相差不大,柱頭固定相變臟或流失可能性更大,這時(shí)可以將進(jìn)樣頭擰開(kāi),將微孔濾片超聲,柱頭刮去一部分填料,重新填上新填料擰緊,不過(guò)這個(gè)對(duì)技術(shù)要求較高且不能經(jīng)常做,否則用不了幾次,色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效降低而報(bào)廢。
 
如果上述不能解決問(wèn)題,可能是柱塌陷造成的,此時(shí)需要更換色譜柱。
 
溶劑問(wèn)題
 
目前HPLC分析多為反相色譜,流動(dòng)相多為甲醇、乙腈、水,加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解,最佳的溶解方法是用流動(dòng)相溶解。在實(shí)際分析中,有時(shí)候?yàn)榱藰悠返娜芙庑曰蚍€(wěn)定性加入了一點(diǎn)的緩沖液,緩沖液的酸堿性可能會(huì)導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化,從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象。此時(shí)需要更換緩沖液,調(diào)整溶劑pH值,或者用流動(dòng)相配置樣品。
 
此外,樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用,避免樣品溶解液的有機(jī)相比例、pH值發(fā)生變化而導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)。
 
進(jìn)樣量
 
當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度大的試劑,如純甲醇、純乙腈,純乙醇,而分析體系中以水為主時(shí),如果樣品進(jìn)樣量大,如定量管為20ul,此時(shí)單一的純物質(zhì)會(huì)出現(xiàn)雙峰,第二峰比第一峰小(每次都不太一樣),且拖尾,保留時(shí)間會(huì)提前(相對(duì)進(jìn)樣量少而言),將進(jìn)樣量減少一半以上,峰型將變?yōu)檎!_@是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大,而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的,此情況下需要減少進(jìn)樣量。
 
另一個(gè)原因是,進(jìn)樣量不一定大,但絕對(duì)量很大,色譜圖上的雙峰緊靠在一起,基本上齊高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色譜柱問(wèn)題)。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了,這是由于進(jìn)樣量過(guò)大,色譜柱過(guò)載造成的。
 
樣品特性問(wèn)題
 
有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),存在互變異構(gòu)現(xiàn)象,而這種互變異構(gòu)體無(wú)法分開(kāi),而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在。在色譜分析時(shí),在一個(gè)特定的條件下(如pH值、流動(dòng)相極性、溫度等),一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰,雙峰靠的很近,基本齊高,不拖尾,條件稍一變化,尤其pH,雙峰現(xiàn)象將消失,如紅霉素等。
 
有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,但在LC-MS下,用質(zhì)譜檢測(cè)器,其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯,如農(nóng)藥啶蟲(chóng)瞇(吡蟲(chóng)清)。
 
pH值
 
體系pH值對(duì)色譜雙峰的影響出現(xiàn)在各個(gè)環(huán)節(jié)上(前面已經(jīng)提到),尤其在緩沖液流動(dòng)相平衡過(guò)程中其影響更為明顯。當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí),受pH的連續(xù)變化影響會(huì)經(jīng)常遇到這種雙峰的情況。另外,在樣品分析時(shí),流動(dòng)相的pH盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點(diǎn),否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生。在用離子對(duì)試劑分析時(shí),選擇不好條件也會(huì)容易引起雙峰的產(chǎn)生。