液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是蕞佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
液相色譜柱可以分為許多種：正相色譜柱，反相色譜柱，離子交換柱，液相色譜柱廠家許多，不一樣的液相色譜柱也會(huì)有不一樣的類型。每個(gè)廠家有每個(gè)廠家的叫法。有的叫液相色譜柱，有的叫色譜柱，有的叫碳十八烷基硅烷化學(xué)建合柱。
液相色譜柱可以分為：正相色譜柱,反向色譜柱，凝膠色譜柱，Hilic色譜柱，離子色譜柱，疏水色譜柱，親和色譜柱，超液相色譜柱，手性色譜柱。
液相色譜柱還有專用色譜柱：如麻黃專用色譜柱，蜂蜜專用色譜柱，利巴韋林專用色譜柱，甘露醇專用色譜柱，乳糖專用色譜柱，肝素鈉專用色譜柱，氨基酸專用色譜柱，益母草專用色譜柱，硫酸軟骨素納專用色譜柱。頭孢聚合物專用色譜柱。抗體剖析專用色譜柱。
1、樣品的前處理：
a、使用流動(dòng)相溶解樣品。
b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制：
液相色譜柱是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
b、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
液相色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體,又由于在HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解, 這類柱可在任何pH與溫度下使用。
氧化鋁
也可用于HPLC,氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可在pH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用。新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用pH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料是蕞近幾年才開始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行中。
當(dāng)然和液相色譜柱的原理一樣，液相色譜的柱長(zhǎng)度，柱內(nèi)徑對(duì)分離效果也有重要的影響．
您現(xiàn)在就可以看到其實(shí)液相色譜柱的分離效果主要取決于其色譜填料，柱長(zhǎng)度，柱內(nèi)徑這幾個(gè)因素，從原理上講，這幾個(gè)因素相同的柱子，其分離效果是完全一樣的．
考慮到這一點(diǎn)，現(xiàn)在您完全根據(jù)這個(gè)更加本質(zhì)的依據(jù)來現(xiàn)在您的液相色譜柱，而不必一定去現(xiàn)在昂貴的標(biāo)準(zhǔn)指定液相色譜柱．
流動(dòng)相流速的選擇：
液相色譜柱是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求蕞佳柱效，使用蕞佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。
