一般意義上的薄層色譜又叫薄板(棒)層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),屬固—液吸附色譜,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn),一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚加大,因此,又可用來精制樣品,此法特別適合用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此外,薄層色譜法還可以用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另一方面若在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚,將樣品點(diǎn)成一條線,則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外,在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí),常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。
薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板或硅膠板(玻璃棒)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板(棒)一端約1cm處的起點(diǎn)線上,涼干或吹干后置薄層板(棒)于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時(shí),將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。記下原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中心及展開劑前沿的距離,計(jì)算比移值(Rf);而棒色譜柱則進(jìn)入氫火焰離子檢測(cè)器(FID)檢測(cè),以峰面積計(jì)算含量。
薄層色譜儀
薄層色譜法簡稱TLC,是在50年代從經(jīng)典柱色譜法和紙色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種色譜技術(shù)。60年代后,人們對(duì)薄層色譜法的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化及擴(kuò)大應(yīng)用等方面進(jìn)行了許多工作,使該方法日趨成熟。薄層色譜分為板色譜和棒色譜兩種。
薄層色譜法工作的過程
首先將要分離的混合物點(diǎn)在用固定相均勻涂布的薄板(棒)的一端;
然后將薄板(棒)的這一端浸入流動(dòng)相,在流動(dòng)相浸濕薄板(棒)的過程中,樣品隨著流動(dòng)相被展開,不同的組分隨流動(dòng)相以不同的速度向前移動(dòng),最終保留在薄板(棒)上的不同位置,從而達(dá)到分離的目的;
再用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)不同的組分進(jìn)行檢測(cè),就可以定性或定量的對(duì)樣品作出分析。
此時(shí)的固定相被稱為載體或吸附劑,而流動(dòng)相被稱為展開劑,被展開的樣品叫做斑點(diǎn)。
薄層色譜的特點(diǎn)
靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便、同時(shí)分離多個(gè)樣品、樣品預(yù)處理簡單、設(shè)備簡單。由于這些特點(diǎn),薄層色譜在實(shí)際工作中的應(yīng)用十分廣泛。
由于通常用薄層色譜分析法進(jìn)行定量分析的過程中,薄層掃描儀是最為重要的,因此對(duì)它進(jìn)行略詳?shù)慕榻B。
薄層掃描儀的基本結(jié)構(gòu)及主要功能基本是相同的,每臺(tái)儀器都包括光源、分光器、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理及信號(hào)輸出幾個(gè)部分。
典型的檢測(cè)方法是吸收檢測(cè)法,其基本測(cè)定原理為,用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長、一定強(qiáng)度的光照射到薄層斑點(diǎn)上進(jìn)行整個(gè)斑點(diǎn)或被斑點(diǎn)反射的光束,根據(jù)光束被斑點(diǎn)吸收后強(qiáng)度的變化來確定組分的含量。 薄層色譜法的優(yōu)點(diǎn)特別適合我國國情,已成為許多實(shí)驗(yàn)室不可缺少的分離手段。該方法在科研、教學(xué)、臨床、生產(chǎn)等各個(gè)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用,分離對(duì)象也無所不包。
棒狀薄層色譜是采用棒狀薄層分離技術(shù)與氫火焰離子化檢測(cè) (TLC/FID) 手段組合而成的專用分析儀器,可檢測(cè)所有的有機(jī)化合物,特別適用于重油類分析,示蹤有機(jī)合成反應(yīng)過程。PX-CF19是在吸收國內(nèi)外薄層色譜基礎(chǔ)上經(jīng)過多年的不斷完善和發(fā)展新近推出的一款可替代進(jìn)口的棒狀薄層色譜儀,可在開放的氣氛下檢測(cè)用氣相色譜和液相色譜方法很難檢測(cè)的樣品,并可以非常簡單的對(duì)于點(diǎn)在色譜棒上的樣品進(jìn)行定量分析。
目前它正向聯(lián)用的方向發(fā)展,如薄層色譜–氣相色–質(zhì)譜聯(lián)用,或都薄層色譜–紅外光譜等的聯(lián)用。
醫(yī)藥工業(yè):薄層色譜在醫(yī)藥工業(yè)中有很廣泛的應(yīng)用,特別應(yīng)用在中草藥、中成藥的成分分析和合成藥物分析。
臨床醫(yī)學(xué):在臨床醫(yī)學(xué)中,它主要用于對(duì)生物樣品和有毒的物質(zhì)進(jìn)行分析。
環(huán)境科學(xué):薄層色譜可以用來進(jìn)行農(nóng)藥及農(nóng)藥殘留分析,或都對(duì)有毒金屬、多環(huán)芳烴進(jìn)行檢測(cè)。
食品化學(xué):食品添加劑的安全性問題已婚經(jīng)越來越多的得到關(guān)注,用薄層色譜對(duì)食品添加劑進(jìn)行分析是一種簡單有效的方法。
化學(xué)化工:薄層色譜在化學(xué)、化工方面也有很多應(yīng)用,例如對(duì)高分子材料的助劑、填料等進(jìn)行分析。